Анализ крови на антинуклеарный фактор

Симптомы, когда стоит сдать анализ

Всегда есть симптомы, появление которых должно насторожить человека, заставить его пройти обследование. Врач должен сориентировать пациента, если есть:

1. Артрит, проявляющийся воспалением сустава, с болью, отеками, нарушенной подвижностью, покраснением кожи над ним, повышением температуры.
2. Не помешает обследование при перикардите, плеврите, причина которых неизвестна.
3. Поражение почек, связанное с нарушением состояния иммунной системы, появление изменений в анализе мочи, в частности, белка, крови.
4. Еще одним показанием является гемолитический вариант анемии, при которой в большом количестве разрушаются эритроциты, повышается уровень билирубина в крови, анализе мочи.
5. Показанием является понижение уровня тромбоцитов, нейтрофилов в формуле лейкоцитов.
6. Проявления на коже в виде сыпи, утолщения, которые возникают после пребывания на солнце.
7. Синдром Рейно, при котором периодически свой цвет меняют пальцы на стопах, кистях. Они становятся бледными, синими или краснеют, нарушается чувствительность, беспокоит боль.
8. Показанием является нехарактерная симптоматика со стороны неврологии или психиатрии.
9. Если повышается температура, развивается усталость, понижается масса тела, увеличиваются лимфатические узлы.

Суть анализа крови на антинуклеарный фактор

Прежде чем углубляться в особенности проведения исследования на АНФ, стоит отметить, что методика была изобретена и начала применяться довольно давно – в 60-х годах прошлого века. Но широкое распространение в диагностической практике получила лишь в начале 80-х годов XX века после усовершенствования. В качестве субстрата еще в 1961 году ученый Beck применял клетки лабораторных животных, и только в 1982 году Tan воспользовался перевиваемой клеточной линией человека HEp-2 для поиска АНФ.

Хотя основная цель использования данного теста – это установление диагноза красная волчанка, все же он считается универсальной методикой и для других коллагенозов (СЗСТ). К последним относятся:

Кровь на РФМК — что это?

• склеродермия;
• дерматомиозит;
• узелковый периартериит;
• хронический активный гепатит и т. д.

Одной из наиболее удобных, и поэтому чаще всего используемых методик для определения в крови пациентов антинуклеарного фактора, считается непрямая иммунофлюорестенция. Исследование проводится при нанесении сыворотки крови на клетки перевиваемой эпителиоидной линии аденокарциномы гортани человека НЕр-2 (содержащих определенный ряд ядерных антигенов) с применением меченого коньюгата (соединения) с антителами.

Этот выбор сделан неслучайно – клетки НЕр-2 – очень удобный субстрат для изучения биоматериала. Они имеют довольно крупные ядра, и при высадке на лабораторных стеклах растут однослойно. В качестве субстрата можно использовать и другие клеточные линии человека, но удачная морфология и культивирование однозначно делает именно НЕр-2 – незаменимым материалом.

В ходе диагностики при инкубации сыворотки обследуемого с клеточным субстратом, при наличии АНА происходит их соединение с соответствующими нуклеарными антигенами. Места связки АНФ с НЕр-2 определяются при использовании меченого флюоресцеином (красителем) коньюгата. Для выполнения оценки результатов произошедших реакций применяется люминесцентный микроскоп, позволяющий дифференцировать характер и степень получившихся связок.

Справка! HEp-2 человека, в отличие от тканевых криосрезов животных, имеют более высокую скорость деления клеток, что дает возможность обнаружить антитела к антигенам, которые экспрессируются лишь при делении. Также в субстрате человека отсутствует клеточный матрикс, снижающий качество визуализации изучаемого свечения.

Что показывает

АНФ-анализ крови позволяет выявить патологии аутоиммунного характера. Исследование информативно в отношении следующих заболеваний:

• Системной красной волчанки.
• Острого рассеянного энцефаломиелита.
• Болезни Шегрена.
• Ревматоидного артрита.
• Очаговой алопеции.
• Болезни Аддисона.
• Анкилозирующего спондилита.
• Антифосфолипидного синдрома.
• Аутоиммунной гемолитической анемии.
• Буллезного пемфигоида.
• Аутоиммунного гепатита.
• Глютеновой болезни.
• Аутоиммунных патологий внутреннего уха.
• Болезни Чагаса.
• Синдрома Черджа-Стросса.
• Хронической обструктивной болезни легких.
• Дерматомиозита.
• Болезни Крона.
• Сахарного диабета I типа.
• Синдрома Гудпасчера.
• Тиреоидита Хашимото.
• Базедовой болезни.
• Синдрома Гийена-Барре.
• Болезни Кавасаки.
• Гнойного гидраденита.
• Первичной нефропатии.
• Идиопатической тромбоцитопенической пурпуры.
• Интерстициального цистита.
• Эритематозной волчанки.
• Синдрома Шарпа.
• Кольцевидной склеродермии.
• Рассеянного склероза.
• Нарколепсии.
• Нейромиотонии.
• Обыкновенной пузырчатки.
• Псориаза.
• Феномена Рейно.
• Васкулита.
• Гранулематоза Вегенера.

Это неполный список заболеваний.

Важно, что анализ АНФ показывает развитие аутоиммунных патологий на самой ранней стадии их течения. Это позволяет врачу определиться с тактикой лечения, а в дальнейшем оценить его эффективность.

Нормы

Существует ряд заболеваний, при которых защитная система принимает клетки собственного организма за чужеродные, после чего начинает ошибочно их атаковать. Большинство аутоиммунных патологий имеют хроническую форму и представляют серьезную угрозу для здоровья. Для того чтобы выявить данные недуги на самой ранней стадии их развития, врачи назначают анализ АНФ. Данная аббревиатура расшифровывается как «антинуклеарный фактор». В некоторых заключениях исследование помечается как АНА. Значение расшифровывается как «анализ на антинуклеарные антитела». АНФ – это клинически значимый показатель, помогающий врачу составить максимально эффективную схему лечения и не допустить развития осложнений.

Общие сведения

Антинуклеарные (антиядерные) антитела представляют собой группу аутоантител, которые, вступая в реакцию с ядрами собственных клеток организма, разрушают их. Поэтому анализ на АНА считается достаточно чувствительным маркером в диагностике именно аутоиммунных нарушений, большая часть из которых сопровождается поражением соединительной ткани. Однако некоторые из видов антинуклеарных антител обнаруживаются и при заболеваниях не иммунной этиологии: воспалительных, инфекционных, злокачественных и пр.

Наиболее специфичны антинуклеарные антитела к следующим заболеваниям:

• системная красная волчанка (СКВ) – заболевание кожи и соединительной ткани;
• дерматомиозит – поражение кожи, мышц, скелетной ткани и т.д.;
• узелковый периартериит – воспаление артериальной сосудистой стенки;
• склеродермия – уплотнение и затвердение соединительной ткани;
• ревматоидный артрит – поражение соединительной ткани суставов;
• болезнь Шегрена – поражение ткани с железистыми проявлениями (снижение секрета слезных и слюнных желез).

Антинуклеарные антитела могут обнаруживаться более чем у 1/3 больных хроническим рецидивирующим гепатитом. Также уровень АНА может возрастать в случае:

• инфекционного мононуклеоза (вирусное заболевание, сопровождается массовым поражением внутренних органов);
• лейкоза (злокачественное заболевание крови) в острой и хронической форме;
• гемолитической анемии (малокровие в результате разрушения эритроцитов);
• болезни Вальденстрема (поражение костного мозга);
• цирроза печени (хроническое заболевание, связанное с изменением структуры печеночной ткани);
• малярии;
• лепры (инфекционное поражение кожи);
• тромбоцитопении (снижение выработки тромбоцитов);
• лимфопролиферативных патологий (опухоли лимфатической системы);
• миастении (патологическая утомляемость мышц);
• тимомы (опухоль из вилочковой железы).

Одновременно с определением антинуклеарных антител в процессе иммуноферментного анализа оценивается концентрация иммуноглобулинов: IgA , IgM , IgG . Обнаружение этих компонентов в крови может свидетельствовать о высокой вероятности развития ревматических заболеваний и коллагенозов.

В случае, когда связь между концентрацией антител и симптоматикой у больного не обнаруживается, само присутствие антиядерных антител в крови является диагностическим критерием и может повлиять на выбор лечения. Сохранение высокого уровня антинуклеарных антител при продолжительном курсе терапии свидетельствует о неблагоприятном прогнозе заболевания. Снижение значений АНА на фоне проводимого лечения может указывать на ремиссию (чаще) или приближающийся летальный исход (реже).

Также антинуклеарные антитела могут быть обнаружены у здоровых людей до 65 лет (3-5% случаев), после 65 (до 37%).

Изучение полученных результатов

После проведения всех необходимых процедур – взятия биоматериала и его лабораторной подготовке к исследованию, проводится оценка и интерпретация результатов. Сюда входит определение титра (концентрации) антител и типа свечения. Значимым параметром для диагностики является показатель концентрации свыше 1:160. К примеру, при обострении ревматизма он может превышать отметку 1:640, тогда как в ремиссионном периоде наблюдается понижение до 1:160–1:320.

Тип свечения показывает мишени АНА, что является особо важным клиническим моментом, направляющим последующие действия врача в назначении диагностических мероприятий. По характеру свечения ядер при использовании НЕр-2 определится свыше 20 вариантов ядерного окрашивания, в зависимости от видов присутствующих антител в биоматериале. К основным из них относятся следующие типы свечения.

• Периферическое. Свечение свидетельствует о наличии анти-ДНК-антител, что подтверждает СКВ. Основным видом антигенов для периферического типа являются гистоновые белки и ДНК.
• Диффузное (гомогенное). Такое свечение наблюдается при СКВ, сопровождающейся поражением структуры почек и похожих ЗСТ, нефрите, склеродермии, а также лекарственно-индуцированной СКВ. Антигены при данном типе представлены дсДНК, гистонатами и нуклеосомами.
• Ядрышковое (нуклеарное). Данный тип характерен для системной формы склеродермии, и определяется при присутствии у пациентов антител – PHК полимераза 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
• Цитоплазматическое. Подобный тип подсвечивания указывает на наличие АНА к тРНК–синтетазам, а именно Jo-1, и наблюдается при полимиозите.
• Гранулярное. Определяется при синдроме Шегрена, инфекционном мононуклеозе, смешанном ЗСТ (Sharp-синдром, MCTD) и лекарственном волчаночном синдроме. Преимущественно присутствующие антигены для этого типа – SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP, и PCNA.
• Крупногранулярное. Характерно для смешанных ЗСТ и, по мнению многих ученых, связано с наличием антигена RNP.
• Мелкогранулярное. Определяется присутствие антител, образующихся против рибонуклеиновых белков – АSSP (АЦЦП), SS-A, SS-B и других. Такие антитела характерны для СКВ, также ее специфических кожных формах, ревматоидном артрите, склеродермии, полимиозите, синдроме Шегрена.
• Центромерное. Данный тип в основном отмечается при склеродермии. Хотя в одном образце крови, особенно у обследуемых с диффузными ЗСТ, в отделенной плазме могут определяться антитела к различным ядерным компонентам.
• Точечные вкрапления в ядре. Этот тип преимущественно выявляется при болезнях печени аутоиммунного характера. При нем могут сочетаться несколько флюоресцентных типов, к примеру, ядрышковый и мелкогранулярный, что обусловлено антителами к Scl-70.

Справка! Отмечено, что при увеличении разведения плазменного биоматериала параметры свечения могут видоизменяться, так как для многих антител характерна смена активности при разной степени концентрации.

АНФ повышен

Антинуклеарные антитела, связываясь с антигенами, образуют иммунный комплекс. Последний, в свою очередь, является пусковым фактором развития воспалительного процесса в стенках сосудов. В результате у человека появляются первые тревожные симптомы системных заболеваний. Анализ же показывает высокие титры.

В этом случае патологию можно выявить, определив тип свечения. Интерпретация результатов:

• Гомогенное. Подобное свечение может свидетельствовать о наличии системной красной волчанки, хроническом гепатите и склеродермии.
• Периферическое. Всегда говорит о развитии системной красной волчанки.
• Гранулярное. Возможные заболевания: синдром Шегрена, системная красная волчанка, ревматоидный артрит, смешанная патология соединительной ткани.
• Ядрышковое. Данный тип свечения характерен для системной красной волчанки, полимиозита, синдрома Шегрена и склеродермии.
• Центромерное. Возможные патологии: кальциноз кожи, эзофагеальная дисфункция, синдром Рейно, телеангиэктазия, склеродактилия.
• Цитоплазматическое. Подобное свечение говорит об аутоиммунных заболеваниях печени или о полимиозите.

Показания к исследованию

Исследование показано при симптомах, не исключающих аутоиммунную патологию соединительной ткани:

• длительно сохраняющаяся повышенная температура тела;
• беспричинное снижение массы тела;
• уменьшение регионарных лимфатических узлов;
• болезненность и скованность в суставах, когда не установлена иная причина патологии;
• боли в мышцах;
• кожная сыпь, особенно на лице в виде «красной бабочки» (нос и щеки рядом с крыльями носа);
• перикардит и плеврит неясной причины;
• изменения в общем и биохимическом анализе крови, когда исключены другие виды патологии.

Также анализ назначается при имеющемся аутоиммунном заболевании для контроля за эффективностью лекарственной терапии.

Показания к исследованию

Врач может направить больного на этот анализ при обнаружении следующих изменений состояния его организма:

• длительно сохраняющаяся субфебрильная температура тела (до 37,5 °С), лихорадка неясного генеза;
• похудение на 5 кг и более за 3-6 месяцев без видимой на то причины (образ жизни больного за этот период не стал активнее, чем был, пищевые привычки не изменились);
• увеличение лимфатических узлов неясного генеза;
• боли в суставах, артриты неясной этиологии;
• боли в мышцах, выраженная общая слабость;
• сыпь на коже по типу васкулита;
• патологические изменения со стороны одновременно многих органов и систем;
• высокая СОЭ без видимых на то причин;
• анемия, снижение уровня лейкоцитов и тромбоцитов в периферической крови;
• повышенная концентрация гамма-глобулинов в крови;
• белок в моче (при необходимости уточнить характер поражения почек, причину протеинурии).

Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2, полуколичественное определение

Метод исследования

Непрямая реакция иммунофлюоресценции НРИФ.

Антинуклеарный фактор (АНФ) – традиционное обозначение гетерогенной группы антинуклеарных антител (АНА), определяемых методом непрямой реакции иммунофлуоресценции (НРИФ). В качестве субстрата (антигена) для АНФ используются клетки линии НЕр-2. Кроме того, высокая частота деления клеток позволяет выявить антитела к антигенам, экспрессируемым в разные фазы митоза. Это делает возможным за одно исследование выявить все основные типы антинуклеарных антител. Определение АНФ методом НРИФ рекомендовано в качестве скринингового исследования в диагностике различных аутоиммунных заболеваний (АИЗ).

Клиническое значение имеет титр выявленных антител и тип флуоресцентного свечения ядра клетки. АНФ в низком титре (1:40 – 1:80) может определяться у клинически здоровых лиц (частота встречаемости повышается в пожилом возрасте, у здоровых родственников пациентов с аутоиммунными заболеваниями), при воспалительных процессах неаутоиммунной природы, при вирусных инфекциях, новообразованиях. Выявление АНФ в титре 1:160 и выше свидетельствует в пользу АИЗ (при отсутствии клинических проявлений — о повышенном риске развития АИЗ). Тип свечения ядра характеризует профиль аутоиммунных антител, т.к. каждая разновидность АНА имеет конкретные клеточные мишени и по-разному «окрашивает» антиген-содержащие структуры внутри клетки в ходе иммунофлуоресценции.

Показания

Важно знать, что АНФ-анализ крови — это исследование, которое назначается с целью подтверждения или исключения наличия аутоиммунных патологий, а также для оценки эффективности проведенного лечения. Заподозрить недуг врач может по следующим симптомам:

Заподозрить недуг врач может по следующим симптомам:

• Длительно сохраняющееся состояние лихорадки без явных причин.
• Болезненные ощущения в суставах.
• Повышенная степень утомляемости.
• Ломота в мышцах и суставах.
• Кожные проявления без явных причин.
• Частые эпизоды мышечных судорог.
• Повышенная температура тела.
• Уменьшение массы тела.
• Регулярные эпизоды тошноты.
• Головная боль.
• Нарушение слуха.
• Диарея.

Кроме того, АНФ-анализ назначается при подозрении на наличие ревматического заболевания. Исследование проводится после получения результатов лабораторной диагностики, в которых увеличены показатели СОЭ, ЦИК и С-реактивного белка.

Что показывает и как проводится анализ на антинейтрофильные антитела (АНЦА)

В работу берется плазма без фибриногена. Сначала венозную кровь центрифугируют, отделяя плазму от кровяных клеток, потом удаляют фибриноген.
Исследование проводится методом непрямой иммунофлуоресценции. В качестве диагностикума применяются помеченные нейтрофилы. После взаимодействия с исследуемой плазмой в случае положительного результата выявляется свечение.

Свечение бывает двух типов:

1. перинуклеарного (пАНЦА), когда антитела образуются к миелопероксидазе;
2. цитоплазматического (цАНЦА), если антигеном является лизосом протеиназа-3.

Перинуклеарное свечение, или пАНЦА-анализ, более характерен для аутоиммунной патологии желудочно-кишечного тракта и печени. Цитоплазматическое свечение выявляется при гранулематозе Вегенера и других ангиитах.

Гранулематоз Вегенера – аутоиммунное заболевание некрупных сосудов с образованием гранулем. Процесс локализуется в легких и верхних дыхательных путях, глазных яблоках и почках. При отсутствии своевременного и правильного лечения прогноз неблагоприятный.

Механизм образования

Антинуклеарные антитела и рецепторы

В норме собственные клетки организма даже в разрушенном состоянии иммунного ответа не вызывают. Однако сбои в работе иммунной системы наблюдаются постоянно даже у здоровых лиц, и при неблагоприятном стечении обстоятельств иммунитет может сформироваться на любой из компонентов клетки. В организме предусмотрена своеобразная система «отбраковки» патологических антител, в большинстве случаев она срабатывает, антитела уничтожаются, не вызывая болезнь.

Однако в некоторых случаях антинуклеарные антитела возникают в больших количествах и оказываются вовремя не распознаны организмом как патологические. Чаще всего это бывает при обширных солнечных ожогах, когда миллионы клеток кожи оказываются повреждены ультрафиолетом. Ядра погибших клеток оказываются непосредственно во внутренней межклеточной среде организма, где их встречают иммунные клетки — лимфоциты и макрофаги.

ДНК из ядер, гистоновые белки и другие белковые и нуклеиновые компоненты могут быть настолько повреждены ультрафиолетовым излучением, что в некоторых случаях изменяются до неузнаваемости. Именно это и провоцирует иммунные клетки вырабатывать против них антитела, как против чужеродных веществ.

В заключение

Аббревиатура АНФ расшифровывается как антинуклеарный фактор. В норме он не должен присутствовать в крови здорового человека или же его концентрация должна быть менее 1:160. Анализ на АНФ назначается для того, чтобы выявить у пациента патологии аутоиммунного характера на самой ранней стадии их развития.

Суть метода: при проникновении в организм провоцирующих агентов защитной системой начинают вырабатываться антитела. Их задача – атаковать антигены и уничтожить их. Для выявления данной реакции у пациента осуществляется забор венозной крови с последующим отделением сыворотки. В последнюю добавляют специфические антигены и оценивают дальнейшие реакции.

Иммунная система человека – уникальный слаженный механизм, способный реагировать на любые внешние внедрения патогенных факторов, тем самым защищая организм от целого ряда заболеваний. Но как известно, из каждого правила есть исключения, и в данном случае они выглядят как реагирование иммунитета на собственные клетки, что получило название аутоиммунные болезни.

При данных патологиях идет выработка антител, атакующих здоровые клетки, поражая или уничтожая их. В результате происходит нарушение функционирования отдельных тканевых структур и даже органов. Такие патологии из-за своей распространенности и вовлеченности в процесс нескольких органов или систем получили название системных заболеваний.

При появлении современных методов лабораторной диагностики, одним из которых является АНФ анализ крови на поиск антинуклеарного фактора, позволяющий выявить антинуклеарные (антиядерные) антитела и определить причину патологии. Данный показатель является одним из маркеров системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ), принятым как «золотой стандарт» данного вида исследований.